大规模蛋白纯化服务实验服务内容

一、参数信息

1.               纯化技术平台配备工业化级层析系统，支持多技术组合工艺：

1.               亲和层析：使用 5-50cm 直径层析柱（填料类型：Ni-NTA、Protein A/G、Strep-Tactin®），单次处理上样量可达 500mL-5L

2.               离子交换 / 疏水层析：搭载 Capto™/MabSelect™等高性能填料，实现电荷 / 疏水性差异蛋白的规模化分离

3.               膜层析技术：适用于高粘度样本快速除杂，配合切向流过滤（TFF）系统进行浓缩换液

1.               处理规模

1.               样本体积：50mL-5L（对应粗提蛋白量 5mg-5g）

2.               成品产能：单次服务可纯化获得50mg-2g目标蛋白（依纯度要求及蛋白特性调整）

1.               纯度与质控

1.               基础纯化：纯度≥90%（适用于工业酶原料）

2.               药用级纯化：纯度≥95%（符合 ICH Q6B 标准，提供 HPLC/SEC-MALS 检测报告）

3.               超高纯度定制：纯度≥98%（需三步以上层析工艺，含宿主蛋白（HCP）/ 内毒素检测）

1.               工艺周期

1.               单标签亲和层析（500mL 样本）：3-5 个工作日

2.               三步组合工艺（亲和 + 离子交换 + 凝胶过滤）：7-10 个工作日

3.               含工艺放大验证（从 50mL 到 5L）：额外增加 3-5 个工作日

二、使用信息

1.               服务流程

1.               预处理阶段：客户提供粗提样本（细胞裂解液 / 发酵上清），我方进行蛋白浓度、杂质水平预检测

2.               工艺开发：通过小试优化层析条件（填料选型、Buffer 配方、洗脱梯度），提供纯化回收率预评估报告

3.               规模放大：使用 AKTA Pilot/ÄKTA Pure 250 系统进行工业化层析，实时监控压力、流速、紫外吸收值等参数

4.               终端处理：完成超滤浓缩（10-100kDa 截留分子量）、无菌过滤（0.22μm）及冻干（可选西林瓶 / 铝箔袋包装）

1.               适用场景面向生物制药（抗体药物中间体、重组疫苗抗原）、工业酶制剂（食品级蛋白酶、纤维素酶）、诊断试剂（抗原 / 抗体原料）的中试生产及量产前工艺验证。

2.               客户需提供材料

1.               粗提样本（注明体积、保存条件、上游表达系统及标签类型）

2.               目标蛋白特性（等电点、分子量、稳定性耐受范围）

3.               特殊要求（如无动物源成分、GMP 级生产记录、生物安全等级 3 级样本处理）

三、注意事项

1.               实验前

1.               建议粗提样本中目标蛋白占比≥10%（过低浓度可能导致纯化成本显著增加，需提前进行表达优化）

2.               膜蛋白 / 糖蛋白等复杂蛋白需提供纯化耐受条件（如去垢剂类型、温度限制）

1.               实验中

1.               每 2 小时反馈层析图谱与关键参数，若出现回收率低于预期（＜50%）或杂质残留超标，需共同确认是否调整洗脱策略

2.               标签切除服务（如 TEV 酶切）需客户提供足量酶切试剂，且需额外预留 24 小时反应时间

1.               实验后

1.               冻干成品建议在 - 20℃批量储存，液体样本（体积＞10mL）需分装至无菌容器并 - 80℃冻存，避免反复冻融

2.               提供 3 个月内免费工艺追溯服务（含层析原始数据、HCP 残留检测原始图谱）

1.               合规与安全

1.               符合 GLP 规范，药用级纯化可提供工艺验证报告（含设备清洁验证、杂质残留检测方法学确认）

2.               生物安全样本（如重组病毒蛋白）需提前提交《特殊样本处理申请表》，签署三方安全协议