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酵母 tRNA介绍

一、产品概述

酵母 tRNA 是从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中提取的天然转移核糖核酸，作为蛋白质合成的关键分子，其核心功能是携带特定氨基酸至核糖体，并通过反密码子与 mRNA 的密码子互补配对，确保遗传信息的精准翻译。商业化酵母 tRNA 通常为白色或类白色粉末（冻干形式）或溶液，具有以下特性：
  • 来源：高纯度酵母提取物，经多级纯化工艺（如柱层析、苯酚抽提等）去除杂质和核酸酶。
  • 结构：典型的三叶草二级结构，包含氨基酸臂、反密码子环、二氢尿嘧啶环（D 环）和 TψC 环，平均长度约 75-90 个核苷酸，分子量约 25 kDa。
  • 活性：保持天然构象，可支持体外翻译系统（如兔网织红细胞裂解液）的氨基酸转运功能。

二、产品规格与类型

根据应用需求，酵母 tRNA 分为不同等级和形式：
  1. 纯度级别：
    • 分子生物学级：OD₂₆₀/OD₂₈₀ ≥1.8，无 DNase/RNase 污染，适用于 RT-PCR、体外转录等敏感实验。
    • BR 级（生化试剂级）：OD₂₆₀/OD₂₈₀ ≥1.6，含微量杂质，适合作为杂交封堵剂或核酸助沉剂。
    • 定制级：如修饰型 tRNA（如甲基化、荧光标记），用于特殊研究（如蛋白质工程、合成生物学）。
  1. 浓度与包装：
    • 溶液型：常见浓度为 5 mg/mL（DEPC 水或 Tris-HCl 缓冲液溶解），包装规格从 1 mL 到 100 mL 不等。
    • 冻干型：粉末形式，需用户自行溶解，适合长期保存或运输（如 100 mg / 瓶）。
  1. 保存条件：
    • 溶液型：-20℃避光保存，避免反复冻融。
    • 冻干型：-20℃或更低温度保存，保质期通常为 1-3 年。

三、核心应用领域

  1. 分子生物学研究：
    • 核酸沉淀：作为助沉剂（终浓度 20 μg/mL），提高微量 DNA/RNA 的回收效率（如乙醇沉淀法）。
    • 杂交实验：在 Northern 杂交、原位杂交中作为非特异性封堵剂（终浓度 100 μg/mL），减少探针非特异性结合（中国化工企业联盟）。
    • 体外翻译：支持无细胞蛋白表达系统（如 PURExpress®）的氨基酸递送。
  1. 合成生物学与基因工程：
    • 密码子扩展：通过改造 tRNA 的反密码子，引入非天然氨基酸（如叠氮基、荧光标记氨基酸）至蛋白质中。
    • 代谢通路调控：构建变体 tRNA（如识别终止密码子 TAG），实现人工代谢途径的可控表达（X 技术）。
  1. 工业与诊断：
    • 发酵优化：添加至培养基中改善酵母细胞的翻译效率，提升重组蛋白产量。
    • RNA 干扰（RNAi）：作为阴性对照，排除非特异性干扰。

四、主流供应商与产品特点

  1. Sigma-Aldrich：
    • 产品：tRNA from Baker's Yeast（货号 R8759）。
    • 特点：BR 级，15-20 A₂₆₀单位 /mg，适合常规生化实验；提供 5 g 至 100 g 包装，价格适中。
  1. 百奥莱博：
    • 产品：酵母 tRNA 溶液（5 mg/mL，高纯）。
    • 特点：OD₂₆₀/OD₂₈₀ ≥1.9，不含蛋白质和 DNA 污染，适用于 RT-PCR 和杂交实验（中国化工企业联盟）。
  1. 索莱宝：
    • 产品：转移核糖核酸（酵母 tRNA，BR 级）。
    • 特点：100 mg / 瓶，价格经济，适合实验室日常使用。
  1. Thermo Fisher Scientific：
    • 产品：Invitrogen™酵母 tRNA（货号 AM7119）。
    • 特点：分子生物学级，经 DNase/RNase 处理，适合敏感应用（如 mRNA 疫苗生产）。
  1. Takara Bio：
    • 产品：酵母 tRNA（货号 3403）。
    • 特点：提供修饰型 tRNA（如 Cy3 标记），支持荧光原位杂交（FISH）等特殊需求。

五、选购建议

  1. 根据实验需求选择纯度：
    • 若用于 RT-PCR 或测序，优先选择分子生物学级产品（如 Thermo Fisher AM7119）。
    • 若作为助沉剂或杂交封堵剂，BR 级即可满足需求（如 Sigma R8759）。
  1. 关注供应商资质：
    • 选择通过 ISO 9001、GMP 认证的企业（如安琪纽特、Sigma），确保批次稳定性。
    • 若需定制化服务（如修饰型 tRNA），可联系专业生物公司（如 Takara Bio）。
  1. 保存与运输：
    • 冻干产品更便于长期保存，溶液型适合即用型实验。
    • 运输时需使用干冰或冰袋，避免温度波动导致降解。

六、注意事项

  • 酶活性干扰：tRNA 可能作为多聚核苷酸激酶或末端转移酶的底物，若后续实验涉及此类酶，需避免使用 tRNA 作为助沉剂（中国化工企业联盟）。
  • 批次差异：不同批次产品的 OD₂₆₀/OD₂₈₀比值可能略有波动，建议小批量试用后再大量采购。
  • 安全防护：操作时需戴手套和口罩，避免吸入粉末或接触皮肤。

七、典型应用案例

  1. RNA 提取优化：在植物 RNA 提取中，添加酵母 tRNA 可减少多酚类物质对 RNA 的吸附，提高得率。
  1. CRISPR-Cas13a 检测：作为非特异性 RNA 对照，验证检测体系的特异性。
  1. 合成生物学：构建识别非天然密码子的酵母菌株，用于生产含非天然氨基酸的蛋白质药物。

如需进一步了解特定产品的技术参数或订购信息，建议直接联系供应商或访问其官方网站。


特别提醒：

1. 试剂使用干冰填充运输，收到货后及时放入-80℃储存。

2. 避免反复冻融，否则会对试剂活性造成一定影响。